基质胶应用(3)—细胞侵袭实验-技术前沿-资讯-生物在线

基质胶应用(3)—细胞侵袭实验

作者:翌圣生物科技(上海)股份有限公司 2025-06-06T00:00 (访问量:3171)

 

导 语

肿瘤转移是癌症治疗的最大挑战之一,而细胞侵袭实验是研究癌细胞迁移能力的“黄金标准”!如何利用基质胶精准构建体外侵袭模型?实验关键步骤与试剂如何选择?翌圣生物本期技术专栏为您揭晓答案!

PART.01

细胞侵袭实验

细胞侵袭实验通过模拟癌细胞穿透基底膜的过程,评估其迁移与侵袭能力,广泛应用于抗肿瘤药物筛选、转移机制研究及靶向治疗开发。实验中,基质胶(如翌圣生物Ceturegel®基质胶)作为基底膜替代物,为细胞提供三维微环境,结合Transwell小室形成物理屏障,通过量化穿透基质的细胞数评估侵袭性。

实验优势:

✅ 高灵敏度:可检测微量药物对侵袭的抑制作用

✅ 可视化强:通过染色直接观察侵袭细胞

✅ 适用性广:支持多种肿瘤细胞

图1.细胞侵袭实验过程

PART.02

实验步骤

首先将拿到的Ceturegel®基质胶冻融后按照原液1:8稀释(终浓度不要超过3 mg/mL)来包被Transwell小室底部膜的上室面,置37℃、30 min - 8 h使基质胶聚合成凝胶,使用前用无血清培养基进行基底膜水化30 min。

将细胞饥饿12 - 24 h以去除血清的影响。

消化细胞,终止消化后离心弃去培养液并用PBS洗1 - 2次,用含无血清培养基重悬调整细胞密度至4×104~5×105个/mL 。。

取细胞悬液100 μL加入Transwell小室。

在24孔板下室加入600 μL含20%FBS培养基,添加时要避免下层培养液和小室间产生气泡,产生气泡易使下层培养液的趋化作用减弱甚至消失。

培养细胞:常规培养12 - 48 h(时间主要依癌细胞侵袭能力而定)。

取出Transwell小室,弃去孔中培养液,用不含钙的PBS清洗2遍,4%多聚甲醛固定10 - 30 min,将小室适当风干。

使用0.1%结晶紫染色5 - 20 min,用棉签轻轻擦掉上层未迁移细胞,用PBS洗3遍于显微镜下随即5个视野观察细胞,记数。

PART.03

实验结果

图2.细胞侵袭后经结晶紫染色的结果

PART.04

常见问题及解答

细胞不转移?

QA

①细胞侵袭转移能力比较弱。
②基质胶浓度不佳铺的太厚,需要做预实验摸索。
③细胞给的量少可尝试增加细胞数量。
④细胞没有用PBS洗1-2 遍,用胰酶消化后,必须将含血清的培养基洗去。
⑤细胞的活性太差,活性不好的细胞做侵袭实验难度较大。

染色后细胞分布不均一?

QA

①小室未平衡放置于孔板中。

②细胞悬液加入时局部过多。

③小室有倾斜或晃动。

④小室本身渗透膜不平。

PART.05

产品详情

产品名称

货号

规格

Ceturegel® Matrix LDEV-Free基质胶

40183ES

1.5 mL/5 mL/10 mL

PerfCell™ Trypsin (0.25%), phenol red胰酶溶液(0.25%),含酚红

40126ES

100 mL

Fetal Bovine Serum Gold 胎牛血清(特级)

40130ES

50 mL/500 mL

PBS(1×)细胞培养级

41403ES

500 mL

0.5%结晶紫染色液 Crystal Violet Stain Solution

60506ES

100 mL

24孔细胞小室,PC膜,8μm,灭菌,TC处理

84052ES

12个/板

24孔细胞小室,PET膜,8μm,灭菌,TC处理

84051ES

12个/板

 

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